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乳酸脱氢酶测定方法

2018-09-27 10:34 来源:网络 作者:网络

我们知道,现实生活中存在着各种各样的的酶,这些酶可以单独作用,也可以相互作用,对我们的人体产生很大的影响,但是相信大家对于酶的测定方法还不是很熟悉吧,不同酶的测定有不同的方式方法,而且方式方法也种类不一,现如今乳酸脱氢酶测定方法成为很多人研究的领域话题,那么到底该如何测定呢,下面就让我们一起来了解一下乳酸脱氢酶测定方法吧。

方法:

实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制,37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液同生物素标记抗体工作液 100μl,37℃,60分钟。

5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止。

7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度OD值。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

以上内容为我们介绍了乳酸脱氢酶测定方法,我相信这些内容可以引起大家的兴趣,我相信大家可以有效的最快的直接的测定出乳酸脱氢酶,可能你也是一个研究爱好者,那就赶快去实践一翻吧!

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